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高效液相色谱法子的开垦是一个复杂的历程，但无论再复杂，也有其规律可寻。法子开垦历程中，一个总的法则是：先找到标的化合物的峰，而后调动峰形，再是进一步完备。
1.找到标的化合物的峰要找到标的化合物的峰，咱们该怎样开展办事，先举一个例子，上面是剖析氟康唑氯化钠打针液的一个谱图：
谱图上的实质重要囊括：色谱柱、波长、滚动相、温度、流速和进样量这几项。这象征着如果这几个色谱前提都断定下来了就也许基本以为这个法子曾经开垦胜利，因而开垦法子时咱们也许经过逐个的考核这几个色谱前提来举行。
考核色谱前提是须要经过在色谱仪赶上样来举行的，这就须要咱们首先创办一个初始前提，即答复从何最先的题目。在答复好“从何最先”这个题目以前，咱们先要领会咱们的被剖析物，就像一场战役，首先要懂得本身的仇人是谁相同，咱们要领会它的物理、化学性质，希奇是化学组织式希奇关键。因而，色谱法子开垦办事也许经过下列的环节来张开：
1）采集质料对它的分子量、组织式，以及在水、甲醇、乙腈、四氢呋喃、正己烷和异丙醇中的消融度有一个开端的领会。对分子量的领会在筛选色谱柱的历程中是希奇重大的，由于色谱柱填料的孔径对化合物的离别具备重大的影响。
填料孔径对离别度和峰形是有肯定影响，A的色谱柱通常实用的局限为分子量的，如果分子量太大，在填料为A孔径的柱子上离别度会较量差，由于样本分子在色谱柱上有较好的保存是由于也许加入到填料的微孔内部，与键合在表面上的C18长链彼此效用，通常孔直接径须要大于分子直径的3倍以上才不会对剖析形成影响。是以通常分子量一下的化合物倡导用A的柱子来剖析，分子量大于1W小于20W的用A的来剖析，分子量大于20W的就要用凝胶柱了。
组织式关于分子极性巨细的猜测以及后续调动峰形时具备希奇重大的效用，如－COOH、－NH2、－NHR、－NR2、－OH等都是极性基团，而苯环、己环、－CH＝、－CH2－CH3等都优劣极性基团，凭借阅历大概对其极性做一下判定，测度一下也许在C18上（用得至多，咱们最熟识）的保存功能怎样，再联结标的化合物在上述所说的几种溶剂中的消融度情景，对法子开垦时也许用正相柱依旧反相柱来做一个大概的判定，以及法子开垦告竣后的认证有效用。
2）筛选色谱柱I）填料孔径的筛选：凭借所查质料赢得的化合物分子量讯息来确认色谱柱填料的孔径；
II）填料键合相（键合相是指C18、C8、苯基柱等）的筛选：在没能查到做过该样本的关联质料以前，也许并不领会其极性以前，通常最佳筛选C18柱做为初始的色谱前提。由于C18柱是咱们用得至多的，也是对其色谱保存功能最领会和熟识的，在C18柱上赢得的讯息咱们也许猜测其极性，以及为治理碰到的题目题目下一步也许将选取的法子。
III）填料粒径、色谱柱型号的筛选：在没有希奇指明以前，最佳运用咱们罕用的5um、4.6×mm或mm，和前方首选C18做初始前提相同，是为了便利猜测其保存功能。
3）探测器和波长的筛选当今运用最为广泛的是UV探测器，是以，在不领会其是不是有紫外吸取的处境下，咱们先要领会其这一功能，用准则品配成适合的溶液举行紫外扫描，采集标的化合物最大吸取波长的数据，断定波长；
也许是在有DAD探测器的前提下进几针准则品溶液，经过DAD的三维谱图也许赢得化合物最大吸取波长的关联讯息。
如无紫外吸取，则需采用适合的探测器。由于探测器是咱们监测化合物是不是出峰的对象，是咱们的能看到化合物的“眼睛”，也是咱们开垦法子的基本，是以希奇重大，需用心筛选。
4）滚动相的筛选滚动相的筛选须要凭借探测方法来断定，这边以UV探测器为例。液相的滚动相最罕用的编制有两种，一种是甲醇和水的编制，一种是乙腈和水的编制。
这两种滚动相编制没有太大的差别，但依旧区其余：
重要差别在于：
a.甲醇价值比乙腈廉价良多；
b.乙腈的洗脱才力比甲醇强；
c.甲醇在紫外上的吸取停止波长在nm左右，也即是说在nm下列基线的本底会较量高，与乙腈比拟会大大低沉化合物的峰高，瘦弱标的化合物的探测机灵度；
乙腈的吸取停止波长在nm左右；如果断定的波长在nm下列，则该当筛选乙腈和水做为滚动相编制，如果分离这个波长的地点，则甲醇该当是首选。
d.流速的筛选：与上述所断定的色谱柱型号相对应的流速，4.6mm内径色谱柱选1ml/min。
e.温度的筛选：如化合物对温度没有特其余须要（如温度高了不不变等），则在法子开垦之初，只管运用室温，云云开垦出来的法子普适性会较量广一些。抬高温度常常在背面为了提升标的化合物与其余杂质的离别度时运用的，也许为了低沉柱压等，在进一步优化色谱前提时才去琢磨。
归纳以上所筛选的一些前提做为初始前提，就也许最先下一步的标的——“找到标的化合物峰”。要找到标的化合物的峰，首先就要在咱们最熟识的C18柱上头测试一下，领会化合物的保存才力和大概的极性。
详细的环节是：先用纯甲醇做滚动相，看化合物是不是被洗脱下来，如果被洗脱下来峰高是几许，采集这些数据；
而后滚动相中甲醇的比例以10％的速率递减，即甲醇：水＝90：10、80：20、70：30。。。。纯水，看滚动相从首先的％甲醇——％水的历程中每改动10％的比例，谱图上会多些甚么峰，峰高会不会产生改变，多出来的峰是从那边来的；
这个历程会有三种终于：
1）纯甲醇前提下没能洗脱下来，云云解释化合物的极性很弱，保存才力希奇强，该当也许琢磨用正相编制来做，如筛选硅胶柱；
2）纯水前提下很难出峰而纯甲醇时很快洗脱下来，这象征着咱们也许经过调动滚动相的比例找到这个峰，并联结前方滚动比拟例10％改变的系列数据，筛选适合的滚动相。
3）纯水前提下也依然很快就出峰，这解释化合物的极性很强，此时须要联结分子的组织式来判定，有也许是哪些基团致使了样本这么快的出峰，而后选取响应的对策，琢磨增加缓冲盐，调理pH，如果须要的话，乃至琢磨增加离子对试剂。
通常带有－NH2、－NHR、－NR2等基团的时刻增加含－SO3－磺酸基的离子对试剂（如辛烷磺酸钠）以增加保存，而带有－SO3－、－PO4－等极性基团的化合物，则需增加如四丁基溴化铵、四丁基氢氧化铵等含N＋R4的离子对试剂。
2.调动峰形经过调动滚动相中的酸或碱或缓冲盐的pH来完结对峰形的调理。
3.进一步完备法子进一步完备法子，主如果治理样本中的题目，如保存时候、标的化合物与杂质的离别度等。
滥觞：剖析圈
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