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色谱柱可分为填充柱和开管柱两大类。多为金属或玻璃制做。有直管形、盘管形、U形管等形态。液相色谱正常均采取填充柱。色谱柱的离别成绩取决于所抉择的不乱相，以及色谱柱的制备和职掌前提。
对于色谱柱的疑义小析姐搜罗了个问答，指望正好有你体贴的。
提醒：目测个题目看完须要65分钟，讯息量超大，须要收藏。
1.网上对柱子是不是能够反冲向来有斗嘴，那甚么样的柱子能够反冲，甚么弗成以。反冲后是正者用，依旧反着用。详细到各型号柱子不不过ODS柱，其余如，正向柱、 柱、离子互换柱等 都有评释。
答：正常的正相悖相柱理当都能反冲，惟独两端筛板孔径差错称的柱子不能反冲，不过方今如许的柱子曾经比较罕有了。反冲是为了把柱头的混浊物荡涤掉，反冲后依旧正着用比较好，免得柱子的两端都被混浊，咱们向来倡导的是：正向应用，反向荡涤。
2.我在做法子开垦的时光,用乙腈和水做为崎岖相,在调度梯度的时光发觉，刚开端用60%乙腈，RT为2.5分钟，调到40%乙腈，RT没有变动，30%也没有变动，向来调到20%的时光，RT猛然变到了约13分钟，就教这是甚么出处？我用的是离子交柱。
答：离子互换柱的保存时光紧要由洗脱液的离子强度和pH决议，你此刻讲的比较简明，须要把你的法子说的详细一点才能做详细的剖析。譬喻，剖析物是甚么环境，其含有极性电离基团和非极性基团是甚么性质？离子互换柱是齐集物基质依旧硅胶基质？水相是甚么缓冲盐？
3.对于一根罕用的C18柱，拿到一根新柱的时光理当奈何实行活化及维持？为甚么要如许做？
答：新柱活化，现实上是一个均衡的经过，除了用崎岖相均衡外，偶尔候还必需用所测样本对新柱实行均衡，非常是测定分子量比较高的多肽，非常紧要。由于，分子量高的物资分子，分散速率慢，均衡所需时光也响应较长。详细均衡方法也很简明，多进每次样本，直到峰面积和保存时光不乱，再实行正式进样测定。
倘若要放慢均衡时光，把前方用来均衡的进样样本浓度加大，大概不等洗脱达成，接续进样多针。用待测物对新柱均衡，宗旨是：将硅胶基质填料表面具备非奇异性吸附的位点的吸附才能饱和掉。
4.测定多肽，正常采取甚么柱子？崎岖相是乙腈和水，再有微量的TFA。非常是像相似三肽的短肽，理当何如抉择柱子？
答：分子量不高的多肽正常采用惯例C18柱就可以测定，也实用离子互换柱、水性C18柱和Hilic亲水影响柱的。
5. 柱在进酸性样本时，很伤柱子，如应用一段时光后，柱效低沉，峰形改动，怎样复原？
答： 柱测酸性样本，理当是用 柱的HILIC形式。酸的存在大概会使略带负电荷的 官能团质子化，导致应用一段时光后对于某些类的剖析物保存性质有所改动或呈此刻柱效降落。发起：用5～10倍的柱体积的含0.5～1.0％NH3的乙腈-水(50：50)溶液荡涤该柱（荡涤后固然要再用不含碱的崎岖相洗去过剩氨），此后，再实行剖析这类酸性剖析物时发起在崎岖相中稍微增加少量氨如，0.1％。
6.色谱柱的技能都有哪些？比方，封尾等，这些技能在运历时都展此刻那处？
答：色谱柱技能囊括填料技能和装柱技能，填料技能自不待言，填料的是非对色谱柱离别本能和抉择性有决议性影响。装柱技能也没有设想中的这么简明，不同不乱相、不同粒径、不同柱管内径和长度，装柱工艺都有所不同，要装出周密、不乱、均一的柱床，更多是一门艺术，须要阅历积攒。
国内和海外想比，我以为色谱柱的差别在于：国内公司过去都不会自身开垦填料，正常买海外现成填料装柱，买到的填料品质遏制权不在自身手里。其它由于装柱史籍短，阅历积攒少，装柱工艺也没有齐备到达海外水准。其它，对色谱柱本能很关键的基本材料——裸硅胶，国产的还不过关，在纯度、粒径和孔径的均一性方面和海外产物比拟，差别很大。
7.色谱柱技能的差别在那处？
答：色谱柱技能囊括填料技能和装柱技能，填料技能自不待言，填料的是非对色谱柱离别本能和抉择性有决议性影响。装柱技能也没有设想中的这么简明，不同不乱相、不同粒径、不同柱管内径和长度，装柱工艺都有所不同，要装出周密、不乱、均一的柱床，更多是一门艺术，须要阅历积攒。
国内和海外想比，我以为色谱柱的差别在于：国内公司过去都不会自身开垦填料，正常买海外现成填料装柱，买到的填料品质遏制权不在自身手里。其它，由于，装柱史籍短，阅历积攒少，装柱工艺也没有齐备到达海外水准。其它，对色谱柱本能很关键的基本材料——裸硅胶，国产的还不过关，在纯度、粒径和孔径的均一性方面和海外产物比拟，差别很大。
8.柱子在甚么环境下能够荡涤一下筛板呢？本来也商议过这个题目，我也拆下来荡涤过，但我看到柱前段的混浊愈甚，因而就用刀片刮了刮，尔后把荡涤好的筛板装配上去。题目处理了，但应用寿命会不会淘汰呢？
答：柱头混浊了，就掏出混浊的，再装一些填料。由于，参预你刮了些填料，那末宏观的塔板数就少了。假入你刮得未几，仅表面，大概即是一些脏物，因此，题目处理，然则，从此还会有相同题目，再挂，那末不谨慎刮，影响柱效。发起依旧装一个预柱。
9.倘若柱子取下来安放一段时光，须要做甚么维持吗？
答：对正常的反相柱，也即是洗洁净后放到纯 （乙腈）大概是80%左右的 （乙腈）水中，尔后用堵头塞紧柱两端，免得保管溶剂蒸发，理当不须要做非常的维持。
10.崎岖相中参预适当的 呋喃能够改进峰形的机理是甚么？
答：《高效液相色谱法子及运用》于世林编著的上头说： 为质子赐与体、乙腈为质子采用体、 呋喃是偶极溶剂，理当除了极性影响，再有其它的影响要素，至于离别机理，依旧比较繁杂的，不能当做是个全能法子。
11.对于色谱柱的填装题目！我小我以为此刻色谱柱的填装正常有3种环境：
①海外临盆填料并填装达成制品卖到国内；
②海外临盆填料，国内填装出售；
③国内临盆填料，国内填装出售。
正常环境下，第1种环境卖的最贵，也品质 ！不过我就不理解了：倘若是填料的临盆很繁杂的话，那末填装上国内也跟不上去吗？为甚么换在国内填装就会涌现或多或少的一些小题目呢？
答：国内填装会涌现品质小题目，和国内方今遍及办事没有海外谨严关系吧。倘若工艺技能上没有题目，又能订定并实在履行一整套矜重的临盆品质治理举措，国内填装和海外填装并无差别。
12.国产色谱柱在墟市上拥有比例怎样啊？
答：国内色谱柱墟市还没有人实行过科学统计，连一年色谱柱出售总量也众说纷云，更别说国内临盆色谱柱所占份额了。我估量是占30%左右吧。
13.预柱或维持柱用依旧不必的题目！本来剖析中药品种时，我向来都是用维持柱。但到达新公司后，发觉众人都没有应用，几个试验室连维持柱都没找到一个，也即是说众人向来都没实用过。后来问一个老职工，说是有大概影响方剂剖析。我就想问：装配维持柱后会影响样本剖析吗？咱们做的大多是头孢类的抗生素。
答：理当如许说，加之维持柱，确定有益于维持色谱柱不受一些颗粒物资的梗塞，确定无益于离别度和柱效，由于维持柱中心有着死体积的存在然则倘若维持柱接得好并且只管遏制其般配性和时常调换，离别度和柱效理当影响并不大。
头孢类的抗生素也要看究竟是材料药依旧制剂喽，有些材料药，能够按照色谱柱的斲丧抉择增加预柱（中心是个筛板），制剂的话，倘若有辅料严峻干与大概崎岖相盐分比较大，那依旧 配个维持柱。
14.用的是四元梯度泵：A：50% ；B：50%水，时常涌现停或进气泡这是甚么出处？
答：水/ 比例在55：45时，黏度和柱压有个极大值。50：50逼近了这个极值，柱压是比较高的，但，影响柱压 的依旧填料粒径和色谱柱内径，你这个实例中不知用的甚么规格的色谱柱？系统压力高，大概会因溶剂泵中的过滤头供液速率跟不上而导致气泡投入系统，停机也理当是由于气泡投入压力降落的出处，可思量调换液体通量更大的过滤头。
15.填料法子的前三种都是湿法吗，能不能对四种填充法子做一个简略的阐明？
答：
质料显示：在平常前提下，填料粒度＞20μm时，干法填充制备柱较为适合；颗粒＜20μm时，湿法填充较为愿望。填充法子正常有4种
①高压匀浆法，多用于剖析柱和小范围制备柱的填充；
②径向加压法，Waters专利；
③轴向加压法，紧要用于装填大直径柱；
④干法。柱填充的技能性很强，大多半试验室应用已填充好的商品柱。为甚么以20μm为分界点？
16.想请您详细阐明一下反冲色谱柱的法子，是不连探测器吗？
答：反冲即是将柱子反向连到系统中。由于，有混浊物反冲出来，固然不连探测器，出液端直接接到废液瓶就可以够。
17.倘若不应用不锈钢磋议，而改用peek头，是不是能够齐备处理磋议般配题目？
答：色谱柱磋议本来多半不是色谱柱厂商自身临盆的，供货商有多个，VICI，Upchurch，Parker等，他们的准则互相之间不统一，那色谱柱磋议的准则就统一不起来。不过正常这个题目也不深奥决的，换个磋议就可以够了，并且此刻有了万用磋议，能够配悉数不同范例的柱头，不走漏，联接死体积又很小。
18.有的厂商为防止梗塞，应用了较大孔径（2～5μm）的前筛板，这类环境反冲会将填料冲出。那末，你们在应用阐明书中会阐明先后筛板的孔径吗？
答：倘若先后筛板孔径差错称，厂商确定也会在阐明书里非常提到的。
19.我在做多肽药物时碰到以下题目：
1）基线不不乱摇动大，崎岖相A：
1％TF，A：水溶液，B：1％TFA乙腈溶液探测波长nm流速1.0mL/mL甚么出处？何如处理？TFA有甚么影响？崎岖相中不加TFA见不到主峰，基线 。
2）做完肽类样本时何如荡涤C18比较好；
3）药典上先容测定分子量大于的样本，抉择柱子填料的孔径为30nm，30nm与10nm对结局有甚么差别？
答：理当是起“离子对”的影响吧。在做多肽类样本的时光，A孔径的填料相对A孔径确定要抉择性好点，也即是离别度相对比较好点。崎岖相参预TFA，在反相色谱离别多肽和卵白质的试验中，应用三氟 (TFA)做为离子对试剂是罕见的手法。崎岖相中的三氟 经过与疏水键合相和残留的极性表面以多种形式互相影响，来改进峰形、克复峰展宽和拖尾题目。
※三氟 优于其余离子润色剂的出处是它轻易蒸发，能够便利地从制备样本中撤废。另一方面，三氟 的紫外 吸取峰低于nm，对多肽在低波所长的探测干与很小。
20.waters，AtlantisC18柱能够用较高比例的崎岖相，那麽用完后理当怎麽荡涤？在什麽体制中保管比教适合？
答：反相柱均能够用底下通用的法子荡涤维持：崎岖相中不含缓冲盐：剖析达成后，用 （或乙腈）：水＝90：10反向荡涤色谱柱45min崎岖相中含有缓冲盐：剖析达成后，先用 （或乙腈）：水＝10：90反向荡涤45min，尔后再用 （或乙腈）：水＝90：10反向荡涤色谱柱45min；（留意： （或乙腈）：水＝10：90轻易长菌，使历时光弗成超越3天）；
水性柱保管体制也不非常：
短期保管在所用的崎岖相中（不含缓冲盐），中永恒保管在纯 （乙腈）或80%的 （乙腈）/水中。
21.正相硅胶柱正常保管在甚么溶剂内里比较适合？
答：短期和永恒都发起保管在正相测定所用的崎岖相中，正常是正 和一些量的异 。
22. 盐缓冲盐浸透力强，为甚么，是由于与 盐，枸椽酸盐比拟，基团小吗，应用 盐缓冲液与别的缓冲液比拟，会使色谱柱寿命收缩几何？
答：经罕用 盐，在别的前提差未几相同的环境下，柱子寿命确定比不必 缓冲盐相对短一些。但用 盐也有弗成替代的所长吧，不然弗成能此刻大部份人还在用。
23.反相离子对色谱法中，离子对是怎样起影响的，是离子对试剂的非极性端消融在填料的非极性端里，解离端伸向崎岖相，对含胺化合起离子互换影响，依旧样本与离子对生成周密的聚集物，离子对试剂遮蔽化合物中的极性基团，依旧这类聚集物是在解离与聚集的动态均衡当中？
答：首先离子对试剂的解离端和指标离子孕育离子缔合物，低沉其极性，如许就可以较好的在柱子上保存。再者，按照疏水效应理论，离子对试剂的疏水端是很轻易和C18链互相影响的，如许更轻易在柱子上保存，因此我以为离子对试剂影响是搀杂保存机制，即简明的反相保存和离子对保存机制共通影响。
24.四 季铵盐（如，四 氢铵、四 溴化铵、四 氢氧化铵等）在水中电离后，也孕育了相似N＋H(CH2CH3)3的布局N＋(CH2CH2CH2CH3)4，这类布局也能灵验的与Si－O－孕育较强的静电影响，此类离子对用的比较少，但它的影响仅是遮蔽Si－O－吗，它对物资的保存本能有何影响，试验中发觉探测胺化物时，崎岖相中参预 缓冲盐有增加物资保存的趋向，而参预三 则会低沉物资的保存才能？
答：前方提到的四 氢氧化铵等离子对试剂确凿不如辛磺 等极性基是阴离子的离子对试剂用得遍及，出处是酸类极性物资很轻易经过低沉pH值的法子升高在反相色谱中的保存才能，低沉pH可统制酸的电离，使酸处于中性状况而与疏水碳链的做使劲加强。而碱类剖析物则受硅胶基质pH上限的严峻影响（过去上限是8，后来抬到10，直到近来杂化硅胶才将pH上限提到12左右）。
铵盐类离子对试剂确凿有辛磺 等所不具备的樊篱硅醇基影响，但其紧要影响依旧疏水端和疏水不乱相聚集，外露的阳离子亲水端和酸阴离子影响，进而升高其保存才能。固然相同再有第二种评释机理，离子对试剂先和剖析物聚集，遮蔽极性基，进而升高极性剖析物在反相色谱中的保存才能。并且 比 疏水性差，这类环境下，以为反面的聚集机理占优势的大概性更大。探测胺类化合物，参预三 预先和硅醇基聚集，胺和硅醇基影响被三 替代，保存降落是确定的。
25.统一根色谱柱在剖析完 氰胺后，再剖析苯 、山梨酸、糖精钠时为甚么保存时光会提早？
答：色谱柱被强保存物资混浊后，保存时光提早和滞后的环境都有，详细要看混浊物的性质，还要看剖析物、不乱相和混浊物三者共通影响的环境，环境比较繁杂，偶尔候比较难猜测是提早依旧滞后。不过你正常维持的时光，留意在测定后将混浊物用有机溶剂反冲荡涤，就可以够减弱或防止这类环境的涌现。发起每个剖析法子用特地的色谱柱，长眺望，如许更俭省色谱柱的花费。
26.HPLC柱前衍生和柱后衍生的关系题目？1）为甚么要衍生？2）衍生化的分类？3）实行衍生，实用的化合物有哪些？4）实行衍生化的请求有哪些？5）柱前衍生和柱后衍生的优瑕玷？
答：色谱技能中的化学衍生法系指在色谱经过顶用非常的化学试剂（正常称为衍生化试剂或标识试剂）使样本成份变化响应的衍生物此后实行离别探测或实行探测的法子。
宗旨为：
1.将紫外—看来强吸取成效基团引入被探测指标或将其变化成荧光衍生物，以升高探测灵巧度；2.升高对剖析样本的离别和抉择性。
从是不是与HPLC系统联机的角度，化学衍生法分为在线online）与离线∣Offline）两种。从产生衍生化的场面，分为柱前衍生法pre-columnderivatization）与柱后衍生法（post-columnderivatization）两种。方今，在HPLC中，以离线的柱前衍生法（简称柱前衍生法）与在线的柱后衍生法（简称柱后衍生法）应用占多数。
27.多个样本不好不离的时光，就教该何如经过抉择适合的柱子来升高离别度？
答：升高离别度可从三个紧要影响要向来思量，柱效、抉择性和保存因子。可经过减小填料粒径和增加柱长升高柱效；抉择性和不乱相抉择以及pH前提关系，经过抉择适合的色谱柱和适合的pH，能够升高抉择性；偶尔候恰当拉长出峰时光增加保存因子，也可升高离别度。
28. 柱，氰基柱该甚么时光思量用？
答： 柱用于含苯环的馨香族化合物的测守时，具备较高的抉择性。CN柱可做为一个保存才能最弱的反相柱应用，也可做为一个活性低沉的正相柱应用（保存时光比硅胶柱和 柱低不少）。
29.相同范例柱子再有长度，粒径等差别，这些该何如去抉择？
答：长度和粒径都是用来改动柱效的，抉择法则是够用就好。
30.我头几天方才装上一个新的C18柱，在进样过去我用%的 冲了半个多小时。方才看到上头写的要活化甚么的？不懂得我只荡涤半小时就开端用对柱子有没有影响？对出峰甚么的有没有影响呢？
答：不是悉数的测定，都须要对新柱子用所测样本老化。但先按法子程序进样几针，窥察到峰面积保存时光不再有显然变动，再开端正式测定，这是一个好习惯。按你此刻的做法，倘若 针和第二针的峰面积、保存时光没有变动，就继承做没影响吧。
31.此刻色谱柱和仪器的接口还没有准则化吗，除了探测池的相差管较小外，色谱柱的接口与peek头不般配的有哪个型号的色谱柱，此后应用的时光须要留意一点。同时发觉应用过金属磋议的色谱柱再换成PEEK头，常易漏液，这是由于金属头易使色谱柱接口变形吗？
答：色谱柱磋议本来多半不是色谱柱厂商自身临盆的，供货商有多个，VICI，Upchurch，Parker等，他们的准则互相之间不统一，那色谱柱磋议的准则就统一不起来。不过正常这个题目也不深奥决的，换个磋议就可以够了，并且此刻有了万用磋议，能够配悉数不同范例的柱头，不走漏，联接死体积又很小。
32.平常的C18柱能做为正相色谱柱应用吗？正相色谱体制中最罕用也最平常的是那种色谱柱。正相柱在应用经过中与反向柱比拟有甚么须要留意的处所？
答：平常C18柱做为正相柱应用，我还没外传过。正相色谱离别形式是指不乱相的极性比崎岖相的极性大，反过来，崎岖相极性大即是反相。C18不乱相属于疏水性相对比较强的，疏水性强即是极性很弱，理当找不出极性比它更弱的崎岖相了。
正相体制罕见的柱子有：硅胶柱、 柱、CN基柱和Diol二醇基柱，最平常的理当即是硅胶柱。正相柱和反相柱比，最须要留意的是水份，正相柱对水份非常敏锐，崎岖相中水份含量的些微变动对保存时光影响很大，因而正相柱测定前均衡时光须要几个小时乃至更长。
33.色谱柱的柱头范例与不锈钢毛细管磋议有6种联接方法（在教材内里提到），那末咱们用户正常是液相色谱仪是不乱某一个厂家，而是按照样本探测须要调换不同范例的色谱柱，那末何如决断我所采办的色谱柱是不是与不锈钢毛细管是不是般配呢，我过去不过懂得安捷伦和waters都有划定他们自身家的柱子与自身家的仪器配套是最适合的，而其余厂家的色谱柱都很少说起，在不懂得的环境下，咱们该何如抉择？月旭的色谱柱柱头范例属于哪一种范例呢？
答：不锈钢毛细管磋议有个瑕玷，用过一次后卡匝地方和间隔毛细管结尾的长度就不乱死了。倘若下次用的色谱柱的柱头接口深度和本来的不同，就轻易孕育死体积和走漏。孕育的死体积正常不大，倘若只引发柱效的轻微降落而没引发拖尾，这个题目就轻易被疏忽。引发众人
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