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Western，也叫Westernblot,Westernblotblot,Western印迹法，是检测蛋白质抗体的重要方法之一。
运作步骤：
1.用块称量。
2.用液氮，将组织块粉碎。
3.加入RIPA缓冲剂(每克组织3mlRIPA)、PMSF(每克组织30μl,10mg/mlPMSF)，继续保持4℃的Polytron(每克组织3mlRIPA)。
4.PMSF(每克组织30μl,10mg/mlPMSF)，冰上孵化30分钟。
5.移入离心管，4℃大约20,g(15,转)。
6.将上清作为细胞裂解液，分装-20℃保存。
7.蛋白质浓度测定采用Bradford比色法。
8.取相同质量的细胞裂解液(体积*蛋白质浓度)，加2×电泳加样缓冲液。
9.用开水浴3分钟。
10.上样。
11.电泳(浓缩胶20mA，分离胶35mA)。
12.转膜仪转膜(mA40分钟)。
13.薄膜为丽春红染色，胶用考马斯亮蓝染色。
14.显色Westernblot试剂盒。
15.比较记录分析。
扩展将适量浓缩的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液添加到所采集的蛋白样品中。比如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。用5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液，可缩小上样体积，使相同体积的上样孔上样更多。参考有关文献配制5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液，或在℃或沸水浴中加热3-5分钟，使蛋白质完全变性。在室温下冷却后，将蛋白样品直接上样至SDS-PAGE胶样加入样孔。为方便观察电泳、转膜效果及判断蛋白分子量大小，宜采用预染蛋白质分子量标准。电泳时，一般建议在上胶时采用低电压恒压电泳，溴酚蓝进入下层胶时采用高压恒压电泳。至于生物拉德的标准电泳设备或类似的电泳设备，可以将低电压设置在80-V，高电压可设置在约V。为方便电泳，还可以采用恒压方式，整个SDS-PAGE过程都可采用恒压方式，一般将电压设定在V，然后设定定时时间为90-分钟。设定时间可以避免频繁的电泳过头。一般情况下，在电泳时，溴酚蓝到达胶体底部附近即可停止电泳，或者根据预染蛋白质分子量标准的电泳情况，预期目的蛋白已经过适当分离后即可停止电泳。
