导读
色谱柱可分为填充柱和开管柱两大类。多为金属或玻璃制做。有直管形、盘管形、U形管等形态。液相色谱寻常均采取填充柱。色谱柱的别离效果取决于所取舍的静止相，以及色谱柱的制备和职掌前提。
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1、网上对柱子能否能够反冲始终有商量，那甚么样的柱子能够反冲，甚么弗成以。反冲后是正者用，仍旧反着用。详细到各型号柱子不但是ODS柱，其余如正向柱、氨基柱、离子相易柱等最佳都有注解。
答：寻常的正相悖相柱该当都能反冲，惟有两端筛板孔径错误称的柱子不能反冲，不过方今如此的柱子曾经比拟有数了。反冲是为了把柱头的玷污物洗涤掉，反冲后仍旧正着用比拟好，免得柱子的两端都被玷污。咱们始终提议的是：正向哄骗，反向洗涤。
2、我在做法子开采的光阴,用乙腈和水做为起伏相,在调度梯度的光阴觉察,刚着手用60%乙腈,RT为2.5分钟,调到40%乙腈,RT没有变动,30%也没有变动,始终调到20%的光阴,RT倏地变到了约13分钟,请示这是甚么因为?我用的是离子交柱。
答：离子相易柱的保存功夫要紧由洗脱液的离子强度和pH决计，你如今讲的比拟容易，需求把你的法子说的详细一点本事做详细的解析。好比解析物是甚么情景，其含有极性电离基团和非极性基团是甚么性质？离子相易柱是会合物基质仍旧硅胶基质？水相是甚么缓冲盐？
3、对于一根罕用的c18柱，拿到一根新柱的光阴该当奈何施行活化及保护？为甚么要如此做？
答：新柱活化，本质上是一个均衡的进程，除了用起伏相均衡外，有意候还必需用所测样本对新柱施行均衡，稀奇是测定分子量比拟高的多肽，尤为要紧。由于分子量高的物资分子，分散速率慢，均衡所需功夫也响应较长。详细均衡方法也很容易，多进屡屡样本，直到峰面积和保存功夫安定，再施行正式进样测定。
倘使要放慢均衡功夫，把前方用来均衡的进样样本浓度加大，或许不等洗脱实行，不断进样多针。用待测物对新柱均衡，目标是将硅胶基质填料表面具备非稀奇性吸附的位点的吸附本事饱和掉。
4、测定多肽，寻常采取甚么柱子？起伏相是乙腈和水，尚有微量的TFA。稀奇是像宛如三肽的短肽，该当奈何取舍柱子？
答：分子量不高的多肽寻常采用老例C18柱就可以测定，也实用离子相易柱、水性C18柱和Hilic亲水效用柱的。
5、氨基柱在进酸性样本时，很伤柱子，如哄骗一段功夫后，柱效消沉，峰形变换，怎样复原？
答：氨基柱测酸性样本，该当是用氨基柱的HILIC形式。酸的存在或许会使略带负电荷的氨基官能团质子化，以致哄骗一段功夫后对于某些类的解析物保存性质有所变换或展如今柱效下落。意见：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液洗涤该柱（洗涤后自然要再用不含碱的起伏相洗去有余氨），以后再施行解析这类酸性解析物时意见在起伏相中稍微增加一些氨如0.1％。
6、色谱柱的技能都有哪些？比方封尾等，这些技能在运历时都显示在那处？
答：色谱柱技能包罗填料技能和装柱技能，填料技能自不待言，填料的黑白对色谱柱别离功用和取舍性有决计性影响。装柱技能也没有设想中的这么容易，不同静止相、不同粒径、不同柱管内径和长度，装柱工艺都有所不同，要装出严密、安定、均一的柱床，更多是一门艺术，需求阅历积聚。
国内和海外想比，我以为色谱柱的差别在于：国内公司往日都不会本身开采填料，寻常买海外现成填料装柱，买到的填料原料操纵权不在本身手里。其它由于装柱汗青短，阅历积聚少，装柱工艺也没有全部到达海外水准。其它，对色谱柱功用很关键的根底材料-----裸硅胶，国产的还不过关，在纯度、粒径和孔径的均一性方面和海外产物比拟，差别很大。
7、色谱柱技能的差别在那处？
答：色谱柱技能包罗填料技能和装柱技能，填料技能自不待言，填料的黑白对色谱柱别离功用和取舍性有决计性影响。装柱技能也没有设想中的这么容易，不同静止相、不同粒径、不同柱管内径和长度，装柱工艺都有所不同，要装出严密、安定、均一的柱床，更多是一门艺术，需求阅历积聚。
国内和海外想比，我以为色谱柱的差别在于：国内公司往日都不会本身开采填料，寻常买海外现成填料装柱，买到的填料原料操纵权不在本身手里。其它由于装柱汗青短，阅历积聚少，装柱工艺也没有全部到达海外水准。其它，对色谱柱功用很关键的根底材料-----裸硅胶，国产的还不过关，在纯度、粒径和孔径的均一性方面和海外产物比拟，差别很大。
8、柱子在甚么情景下能够洗涤一下筛板呢？平昔也议论过这个题目，我也拆下来洗涤过，但我看到柱前段的玷污愈甚，因而就用刀片刮了刮，尔后把洗涤好的筛板安置上去。题目束缚了，但哄骗寿命会不会增加呢？
答：柱头玷污了，就掏出玷污的，再装一些填料。由于参预你刮了些填料，那末宏观的塔板数就少了。假入你刮得未几，仅表面，或许便是一些脏物，是以，题目束缚。不过以后还会有同样题目，再挂，那末不严慎刮，影响柱效。意见仍旧装一个预柱。
9、倘使柱子取下来安放一段功夫，需求做甚么守护吗？
答：对寻常的反相柱，也便是洗清洁后放到纯甲醇（乙腈）或许是80%左右的甲醇（乙腈）水中，尔后用堵头塞紧柱两端，免得保管溶剂蒸发，该当不需求做特别的守护。
10、起伏相中参预适当的四氢呋喃能够革新峰形的机理是甚么？
答：《高效液相色谱法子及运用》于世林编著的上头说：甲醇为质子赋予体、乙腈为质子采纳体、四氢呋喃是偶极溶剂，该当除了极性影响，尚有其它的影响成分，至于别离机理，仍旧比拟繁杂的，不能看做是个全能法子。
11、对于色谱柱的填装题目！我集体以为如今色谱柱的填装寻常有3种情景：1.海外临盆填料并填装实行制品卖到国内；2.海外临盆填料，国内填装贩卖；3.国内临盆填料，国内填装贩卖。寻常情景下，第1种情景卖的最贵，也原料最佳！但是我就不明晰了：倘使是填料的临盆很繁杂的话，那末填装上国内也跟不上去吗？为甚么换在国内填装就会呈现或多或少的一些小题目呢？
答：国内填装会呈现原料小题目，和国内方今广泛工做没有海外谨严关连吧。倘使工艺技能上没有题目，又能制定并确切施行一整套严厉的临盆原料办理法子，国内填装和海外填装并无差别。
12、国产色谱柱在商场上拥有比例怎样啊？
答：国内色谱柱商场还没有人施行过科学统计，连一年色谱柱贩卖总量也众说纷云，更别说国内临盆色谱柱所占份额了。我测度是占30%左右吧。
13、预柱或守护柱用仍旧不必的题目！平昔解析中药品种时，我始终都是用守护柱。但到达新公司后，觉察众人都没有哄骗，几个尝试室连守护柱都没找到一个，也便是说众人历来都没实用过。后来问一个老职工，说是有或许影响方剂解析。我就想问：安置守护柱后会影响样本解析吗？咱们做的大多是头孢类的抗生素。
答：该当如此说，加之守护柱，必定有益于守护色谱柱不受一些颗粒物资的阻塞，必定无益于别离度和柱效，由于守护柱中心有着死体积的存在不过倘使守护柱接得好，况且只管操纵其般配性和屡屡替换，别离度和柱效该当影响并不大。
头孢类的抗生素也要看究竟是质料药仍旧制剂喽，有些质料药，能够依据色谱柱的耗费取舍增加预柱（中心是个筛板），制剂的话，倘使有辅料严峻做梗或许起伏相盐分比拟大，那仍旧最佳配个守护柱。
14、用的是四元梯度泵A50%甲醇B50%水屡屡呈现停或进气泡这是甚么因为？
答：水/甲醇比例在55：45时，黏度和柱压有个极大值。50：50挨近了这个极值，柱压是比拟高的，但影响柱压最大的仍旧填料粒径和色谱柱内径，你这个实例中不知用的甚么规格的色谱柱？系统压力高，或许会因溶剂泵中的过滤头供液速率跟不上而以致气泡投入系统，停机也该当是由于气泡投入压力下落的因为，可思索替换液体通量更大的过滤头。
15、填料法子的前三种都是湿法吗，能不能对四种填充法子做一个冗长的解说？
质料显示：在寻常前提下，填料粒度＞20μm时，干法填充制备柱较为适合；颗粒＜20μm时，湿法填充较为巴望。填充法子寻常有4种①高压匀浆法，多用于解析柱和小范围制备柱的填充；②径向加压法，Waters专利；③轴向加压法，要紧用于装填大直径柱；④干法。柱填充的技能性很强，大广泛尝试室哄骗已填充好的商品柱。为甚么以20um为分界点？
16、想请您详细解说一下反冲色谱柱的法子，是不连探测器吗？
答：反冲便是将柱子反向连到系统中。由于有玷污物反冲出来，自然不连探测器，出液端直接接到废液瓶就可以够。
17、倘使不哄骗不锈钢磋议，而改用ＰＥＥＫ头，能否能够全部束缚磋议般配题目？
答：色谱柱磋议原本多半不是色谱柱厂商本身临盆的，供货商有多个，VICI，Upchurch，Parker等，他们的准则彼此之间不统一，那色谱柱磋议的准则就统一不起来。不过寻常这个题目也不深奥决的，换个磋议就可以够了，况且如今有了万用磋议，能够配全数不同典型的柱头，不泄漏，贯通死体积又很小。
18、有的厂商为防止阻塞，哄骗了较大孔径（2-5um）的前筛板，这类情景反冲会将填料冲出。那末，你们在哄骗解说书中会解说先后筛板的孔径吗？
答：倘使先后筛板孔径错误称，厂商必定也会在解说书里稀奇提到的。
19、我在做多肽药物时碰到以下题目：1）.基线不安定摇动大，起伏相A：1％TFA水溶液B:1％TFA乙腈溶液探测波长nm流速1.0ml/ml甚么因为？奈何束缚？TFA有甚么效用？起伏相中不加TFA见不到主峰，基线杰出。2）做完肽类样本时奈何洗涤C18比拟好；3）药典上引见测定分子量大于的样本，取舍柱子填料的孔径为30nm，30nm与10nm对效果有甚么差别？
答：该当是起“离子对”的效用吧。在做多肽类样本的光阴，A孔径的填料相对A孔径必定要取舍性好点，也便是别离度相对比拟好点。起伏相参预TFA，在反相色谱别离多肽和卵白质的尝试中，哄骗三氟乙酸(TFA)做为离子对试剂是罕见的机谋。起伏相中的三氟乙酸经过与疏水键合相和残留的极性表面以多种形式彼此效用，来革新峰形、克复峰展宽和拖尾题目。
三氟乙酸优于其余离子妆点剂的因为是它轻易蒸发，能够便利地从制备样本中裁撤。另一方面，三氟乙酸的紫外最大汲取峰低于nm，对多肽在低波好处的探测做梗很小。
20、watersAtlantisC18柱能够用较高比例的起伏相，那麽用完后该当怎麽洗涤？在什麽体制中保管比教适合？
答：反相柱均能够用上面通用的法子洗涤保护：
起伏相中不含缓冲盐
解析实行后，用甲醇（或乙腈）：水＝90：10反向洗涤色谱柱45min
起伏相中含有缓冲盐
解析实行后，先用甲醇（或乙腈）：水＝10：90反向洗涤45min，尔后再用甲醇（或乙腈）：水＝90：10反向洗涤色谱柱45min；（注意：甲醇（或乙腈）：水＝10：90轻易长菌，使历功夫弗成超出3天）；
水性柱保管体制也不稀奇：短期保管在所用的起伏相中（不含缓冲盐），中持久保管在纯甲醇（乙腈）或80%的甲醇（乙腈）/水中。
21、正相硅胶柱寻常保管在甚么溶剂内部比拟适合？
答：短期和持久都意见保管在正相测定所用的起伏相中，寻常是正己烷和极小批的异丙醇。
22、磷酸盐缓冲盐浸透力强，为甚么，是由于与醋酸盐，枸椽酸盐比拟，基团小吗，哄骗磷酸盐缓冲液与此外缓冲液比拟，会使色谱柱寿命增加几许？
答：经罕用磷酸盐，在此外前提差未几同样的情景下，柱子寿命必定比不必磷酸缓冲盐相对短一些。但用磷酸盐也有弗成替代的好处吧，不然弗成能如今大部份人还在用。
23、反相离子对色谱法中，离子对是怎样起效用的，是离子对试剂的非极性端消融在填料的非极性端里，解离端伸向起伏相，对含胺化合起离子相易效用，仍旧样本与离子对生成严密的联合物，离子对试剂遮蔽化合物中的极性基团，仍旧这类联合物是在解离与联合的动态均衡当中？
答：首先离子对试剂的解离端和方向离子构成离子缔合物，消沉其极性，如此就可以较好的在柱子上保存。再者，依据疏水效应理论，离子对试剂的疏水端是很轻易和C18链彼此效用的，如此更轻易在柱子上保存，是以我以为离子对试剂效用是搀杂保存机制，即纯正的反相保存和离子对保存机制共通效用。
24、四烷基季铵盐（如四丁基硫酸氢铵、四丁基溴化铵、四丁基氢氧化铵等）在水中电离后，也构成了宛如N＋H(CH2CH3)3的组织N＋(CH2CH2CH2CH3)4，这类组织也能灵验的与Si－O－构成较强的静电效用，此类离子对用的比拟少，但它的效用仅是遮蔽Si－O－吗，它对物资的保存功用有何影响，尝试中觉察探测胺化物时，起伏相中参预磷酸缓冲盐有增多物资保存的趋向，而参预三乙胺则会消沉物资的保存本事？
答：前方提到的四丁基氢氧化铵等离子对试剂确凿不如辛磺酸钠等极性基是阴离子的离子对试剂用得广泛，因为是酸类极性物资很轻易经过消沉pH值的法子提升在反相色谱中的保存本事，消沉pH可抵御酸的电离，使酸处于中性状况而与疏水碳链的做使劲加强。而碱类解析物则受硅胶基质pH上限的严峻影响（往日上限是8，后来抬到10，直到近来杂化硅胶才将pH上限提到12左右）。
铵盐类离子对试剂确凿有辛磺酸钠等所不具备的障蔽硅醇基效用，但其要紧效用仍旧疏水端和疏水静止相联合，外露的阳离子亲水端和酸阴离子效用，进而提升其保存本事。自然同样尚有第二种注解机理，离子对试剂先和解析物联合，遮蔽极性基，进而提升极性解析物在反相色谱中的保存本事。况且丁基比辛基疏水性差，这类情景下，以为反面的联合机理占优势的或许性更大。
探测胺类化合物，参预三乙胺预先和硅醇基联合，胺和硅醇基效用被三乙胺替代，保存下落是必定的。
25、统一根色谱柱在解析完三聚氰胺后，再解析苯甲酸、山梨酸、糖精钠时为甚么保存功夫会提早？
答：色谱柱被强保存物资玷污后，保存功夫提早和滞后的情景都有，详细要看玷污物的性质，还要看解析物、静止相和玷污物三者共通效用的情景，情景比拟繁杂，有意候比拟难推断是提早仍旧滞后。不过你寻常保护的光阴，注意在测定后将玷污物用有机溶剂反冲洗涤，就可以够增加或防止这类情景的呈现。意见每个解析法子用特意的色谱柱，长眺望，如此更节流色谱柱的花费。
26、HPLC柱前衍生和柱后衍生的关连题目？1）为甚么要衍生？2）衍生化的分类？3）施行衍生，合用的化合物有哪些？4）施行衍生化的请求有哪些？5）柱前衍生和柱后衍生的优瑕玷？
答：色谱技能中的化学衍生法系指在色谱进程顶用特别的化学试剂（寻常称为衍生化试剂或记号试剂）使样本成份转换响应的衍生物以后施行别离探测或施行探测的法子。目标为：1．将紫外—看来强汲取功效基团引入被探测方向或将其转换成荧光衍生物，以提升探测敏捷度；2提升对解析样本的别离和取舍性。
从能否与HPLC系统联机的角度，化学衍生法分为在线online）与离线∣Offline）两种。从产生衍生化的局面，分为柱前衍生法pre-columnderivatization）与柱后衍生法（post-columnderivatization）两种。方今，在HPLC中，以离线的柱前衍生法（简称柱前衍生法）与在线的柱后衍生法（简称柱后衍生法）哄骗占多数。
27、多个样本不好不离的光阴，请示该奈何经过取舍适合的柱子来提升别离度？
答：提升别离度可从三个要紧影响成分来思索，柱效、取舍性和保存因子。可经过减小填料粒径和增多柱长提升柱效；取舍性和静止相取舍以及pH前提关连，经过取舍适合的色谱柱和适合的pH，能够提升取舍性；有意候合适伸长出峰功夫增多保存因子，也可提升别离度。
28、苯基柱，氰基柱该甚么光阴思索用？
答：苯基柱用于含苯环的馨香族化合物的测准时，具备较高的取舍性。CN柱可做为一个保存本事最弱的反相柱哄骗，也可做为一个活性消沉的正相柱哄骗（保存功夫比硅胶柱和氨基柱低良多）。
29、同样典型柱子尚有长度，粒径等差别，这些该奈何去取舍？
答：长度和粒径都是用来变换柱效的，取舍绳尺是够用就好。
30、我头几天适才装上一个新的C18柱，在进样往日我用%的甲醇冲了半个多小时。适才看到上头写的要活化甚么的？不晓得我只洗涤半小时就着手用对柱子有没有影响？对出峰甚么的有没有影响呢？
答：不是全数的测定，都需求对新柱子用所测样本老化。但先按法子程序进样几针，调查到峰面积保存功夫不再有显然变动，再着手正式测定，这是一个好习惯。按你如今的做法，倘使第一针和第二针的峰面积、保存功夫没有变动，就继承做没影响吧。
31、如今色谱柱和仪器的接口还没有准则化吗，除了探测池的进出管较小外，色谱柱的接口与ＰＥＥＫ头不般配的有哪个型号的色谱柱，以后哄骗的光阴需求注意一点。同时觉察哄骗过金属磋议的色谱柱再换成ＰＥＥＫ头，常易漏液，这是由于金属头易使色谱柱接口变形吗？
答：色谱柱磋议原本多半不是色谱柱厂商本身临盆的，供货商有多个，VICI，Upchurch，Parker等，他们的准则彼此之间不统一，那色谱柱磋议的准则就统一不起来。不过寻常这个题目也不深奥决的，换个磋议就可以够了，况且如今有了万用磋议，能够配全数不同典型的柱头，不泄漏，贯通死体积又很小。
32、普遍的C18柱能做为正相色谱柱哄骗吗？正相色谱体制中最罕用也最普遍的是那种色谱柱。正相柱在哄骗进程中与反向柱比拟有甚么需求注意的地点？
答：普遍C18柱做为正相柱哄骗，我还没外传过。正相色谱别离形式是指静止相的极性比起伏相的极性大，反过来，起伏相极性大便是反相。C18静止相属于疏水性相对比拟强的，疏水性强便是极性很弱，该当找不出极性比它更弱的起伏相了。
正相体制罕见的柱子有：硅胶柱、氨基柱、CN基柱和Diol二醇基柱，最普遍的该当便是硅胶柱。正相柱和反相柱比，最需求注意的是水份，正相柱对水份稀奇敏锐，起伏相中水份含量的些微变动对保存功夫影响很大，是以正相柱测定前均衡功夫需求几个小时以至更长。
33、色谱柱的柱头典型与不锈钢毛细管磋议有6种贯通方法（在课本内部提到），那末咱们用户寻常是液相色谱仪是静止某一个厂家，而是依据样本探测需求替换不同典型的色谱柱，那末奈何决断我所采办的色谱柱能否与不锈钢毛细管能否般配呢，我往日但是晓得安捷伦和waters都有规则他们本身家的柱子与本身家的仪器配套是最适合的，而其余厂家的色谱柱都很少说起，在不晓得的情景下，咱们该奈何取舍？月旭的色谱柱柱头典型属于哪一种典型呢？
答：不锈钢毛细管磋议有个瑕玷，用过一次后卡匝地方和间隔毛细管末了的长度就静止死了。倘使下次用的色谱柱的柱头接口深度和平昔的不同，就轻易构成死体积和泄漏。构成的死体积寻常不大，倘使只引发柱效的微小下落而没引发拖尾，这个题目就轻易被粗心。引发众人
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