您当前的位置: >> 溴前景 >> 关于SDS电泳MARKER的问题

关于SDS电泳MARKER的问题

一、marker一定要都跑出来吗?

比如说说明书上市7条带,其实跑出6条带是正常的,可能是跑的时间不够,如果你的蛋白不是很小的话,可以等溴酚蓝前沿刚跑出胶的时候再关电泳仪,这样应该可以有7条带.有的时候还会跑出5条,不过只要在你的目的蛋白的上下两个带都跑出来了就可以了,不一定非要7条.二、marker变成笑脸状怎么办?

第一,胶没有压片

第二胶在板的边缘与中心的胶的流动性可能不同,这个没有办法,跟黏度和表面张力有关。如果各种方法都不能解决上面的现象,个人建议maker换一条道上样,选一条靠近中间的泳道跑一跑。

边缘效应,在边缘两个泳道的样品会这样的。可以试试电泳速度慢点儿......

要么配胶时没压好,胶没配好,要么电泳时电压太大,电渗力强,要么玻板电泳时没夹好,内电泳液是漏的,请逐一排查。

三、marker条带变宽怎么解决?

原因一:上样量过多,应该减少上样量。

对策:加样体积根据样品浓度和凝胶厚度灵活掌握。一般上样体积为10-15μL(即2-10μg蛋白质)。如果样品很稀上样量可以达到μL。原因二:样品溶解不完全。对策:(1)样品应该充分溶解:保持各种蛋白质样品和Marker在上样前能够充分溶解,上样前最好离心一下,实在溶解不掉的颗粒就去掉。(2)可以根据分子量标准的蛋白质试剂盒的要求加入样品溶解液;如果是自行配置标准和未知样品,按照0.5-1.0mg/L样品溶解液。溶解后,将其转移至Eppendorf管,盖上盖子(可以在盖子处加上卡子)后在度沸水中水浴加热3分钟(可以在薄泡沫塑料板上钻出几个与Eppendorf管直径形同的圆洞,Eppendorf管放下去直到盖子边缘约束不能再往下为止,把薄泡沫塑料板的暴露出Eppendorf管的管体大部分的那一面放入沸水浴锅中,薄泡沫塑料板自然飘在沸水表面,便于取用和加热,也可避免沸水溅起。可以一批对于多个Eppendorf管进行不同时间的沸水浴。不要把Eppendorf管扔进沸水浴锅中,盖子可能会被冲开),而后在室温下冷却待用。如果较长时间不用,则将样品放入零下20度冰箱中储存,需用时在取出后使用前在度沸水中加热3分钟室温冷却后再上样,以去掉样品蛋白质中的亚稳态聚合体。(3)改变样品缓冲溶液使得样品能够充分溶解,SDS用量要充分。原因三:SDS电泳带与邻近蛋白质电泳相连。除了上样量过多和样品溶解不完全外,凝胶的加样孔泄露会使得电泳带变宽。加样孔泄露往往由于凝胶与玻璃板之间产生裂纹引起。对策:此时只能重新制备凝胶,梳子拔起时要小心等凝胶凝聚完毕,速度不宜过快,拔起的方向要垂直于凝胶表面;要避免凝胶两侧的玻璃板与凝胶之间产生裂纹,在凝胶制备过程中不要挤压凝胶两侧的玻璃板。

欢迎

转载请注明地址:http://www.1xbbk.net/jwbjj/797.html


  • 上一篇文章:
  • 下一篇文章:
  • 网站简介 广告合作 发布优势 服务条款 隐私保护 网站地图 版权声明
    冀ICP备19027023号-7