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本文均为作者研究生阶段经验总结，转载请注明
1.siRNA电泳
电泳前把玻璃板、电泳槽、梳子用去污剂洗涤，用3%双氧水处理至少一个小时，可过夜。用无水乙醇冲洗，晾干；用DEPC水冲洗，晾干。组装后用3%琼脂封胶，加入DEPC水检验是否封严。
图1.垂直电泳仪
1.1制胶
按照下表配方配制变性电泳凝胶：
配制后摇匀，液体中无尿素颗粒（非常关键），倒板前加.5ul10%的APS，45ulTEMED，然后快速摇匀，倒胶插梳（快），凝胶时间2-3h，可过夜（如果过夜，可将凝胶密封置于4摄氏度，防止表面干燥，凝胶皱缩，影响跑胶结果）。
配约ml0.5xTBE电泳缓冲液，倒入槽电泳槽中，拔出梳子，用灭好的注射器冲洗上样孔。
1.2上样
按下表混合小RNA与上样缓冲液：
移液器吸打混匀，沸水浴5min，迅速冰上冷却5min后上样（不要忘记Marker）。
1.3电泳切胶
上样结束后10mA恒流，电压调到最大，电泳大约3h，根据Marker溴酚蓝电泳位置具体决定（电泳时可将电泳槽置于冰水混合物中，防止温度过高，导致凝胶融化，泳道歪斜）。电泳结束后，小心拆开夹层玻璃，用小刀挑起凝胶一角，浸入0.5xTBE中，凝胶即在表面张力作用下取下，尽量不要把胶弄碎，加1滴EB，摇20min染色。染色后在紫外灯下观察记录，切除所有可以看到条带的部分（siRNA在紫外灯下看不到，保存图中红框所示凝胶），并在凝胶右上角切出斜角标记，浸于0.5xTBE中。
图2.siRNA电泳结果
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2.转膜
转膜前将装置用3%双氧水处理至少一个小时，可过夜。用无水乙醇冲洗，晾干；用DEPC水冲洗，晾干。切尼龙膜，大小比胶稍大，用DEPC水处理5min，用0.5xTBE浸泡5-10min。切4张与膜差不多大的滤纸。按照下面的方法将尼龙膜和滤纸：从白板往上依次是2张滤纸，尼龙膜，凝胶，两张滤纸，黑板。每层均用玻璃棒赶气泡（注意不要把胶压碎），在0.5xTBE中转膜。黑板和槽的黑色在一边。接通电源，电路设置电流2mA/cm2，转膜0.5h。（期间准备EDC），转膜结束后卸下转膜夹层，将膜取出，紫外灯下观察，正面下端做好标记，置于0.5xTBE中。EDC配方：
1M的盐酸调PH值到8.0。在用前10min向其加入0.gEDC，定容至24mL。把一张比膜略大的滤纸浸没到配好的EDC中，2-3min。剪一块保鲜膜，展平于桌面，将滤纸铺于保鲜膜的一端，尼龙膜与RNA结合的背面和滤纸结合。用保鲜膜包起来，确保膜表面没有气泡，60℃，1h。用DEPC水将膜表面的EDC冲洗干净。在紫外交联仪中进行紫外交联，之后用滤纸包好，装在封口袋中（一端封口），80℃，2h，烘干后的膜可以短期保存，但推荐尽快进行杂交显影。
3.杂交
使用DEPC水清洗杂交管，然后顺管壁加入待杂交的尼龙膜，不带有核酸的面紧贴管壁，按下表配方配置预杂交液和杂交液：
