1、网上对柱子能否能够反冲始终有斟酌，那甚么样的柱子能够反冲，甚么不成以。反冲后是正者用，仍然反着用。详细到各型号柱子不单是ODS柱，其余如正向柱、氨基柱、离子互换柱等最佳都有诠释。
答：时时的正相悖相柱该当都能反冲，惟独两端筛板孔径差错称的柱子不能反冲，不过当前如此的柱子曾经对照罕有了。反冲是为了把柱头的浑浊物洗濯掉，反冲后仍然正着用对照好，免得柱子的两端都被浑浊。咱们始终提议的是：正向操纵，反向洗濯。
2、我在做办法开采的功夫,用乙腈和水做为起伏相,在调换梯度的功夫发掘,刚开端用60%乙腈,RT为2.5分钟,调到40%乙腈,RT没有变动,30%也没有变动,始终调到20%的功夫,RT蓦地变到了约13分钟,叨教这是甚么道理?我用的是离子交柱。
答：离子互换柱的保存工夫首要由洗脱液的离子强度和pH决计，你目前讲的对照简朴，须要把你的办法说的详细一点才干做详细的解析。比方解析物是甚么处境，其含有极性电离基团和非极性基团是甚么性质？离子互换柱是会合物基质仍然硅胶基质？水相是甚么缓冲盐？
3、对于一根罕用的c18柱，拿到一根新柱的功夫该当怎么举办活化及保护？为甚么要如此做？
答：新柱活化，本质上是一个均衡的进程，除了用起伏相均衡外，有意候还必需用所测样本对新柱举办均衡，稀奇是测定分子量对照高的多肽，尤为严重。由于分子量高的物资分子，散布速率慢，均衡所需工夫也响应较长。详细均衡方法也很简朴，多进屡次样本，直到峰面积和保存工夫安定，再举办正式进样测定。
要是要加速均衡工夫，把前方用来均衡的进样样本浓度加大，也许不等洗脱完竣，连结进样多针。用待测物对新柱均衡，方针是将硅胶基质填料表面具备非稀奇性吸附的位点的吸附才略饱和掉。
4、测定多肽，时时采纳甚么柱子？起伏相是乙腈和水，尚有微量的TFA。稀奇是像相像三肽的短肽，该当怎么取舍柱子？
答：分子量不高的多肽时时采用惯例C18柱就可以测定，也有效离子互换柱、水性C18柱和Hilic亲水影响柱的。
5、氨基柱在进酸性样本时，很伤柱子，如操纵一段工夫后，柱效低落，峰形改革，怎样复原？
答：氨基柱测酸性样本，该当是用氨基柱的HILIC形式。酸的存在或许会使略带负电荷的氨基官能团质子化，导致操纵一段工夫后对于某些类的解析物保存性质有所改革或显露在柱效降落。倡议：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液洗濯该柱（洗濯后固然要再用不含碱的起伏相洗去过剩氨），此后再举办解析这类酸性解析物时倡议在起伏相中稍微增加一些氨如0.1％。
6、色谱柱的本领都有哪些？好比封尾等，这些本领在运历时都显露在那边？
答：色谱柱本领包罗填料本领和装柱本领，填料本领自不待言，填料的利害对色谱柱别离机能和取舍性有决计性影响。装柱本领也没有设想中的这么简朴，不同牢固相、不同粒径、不同柱管内径和长度，装柱工艺都有所不同，要装出精密、安定、均一的柱床，更多是一门艺术，须要阅历积蓄。
国内和海外想比，我以为色谱柱的不同在于：国内公司过去都不会本身开采填料，时时买海外现成填料装柱，买到的填料品质操纵权不在本身手里。其它由于装柱史乘短，阅历积蓄少，装柱工艺也没有统统到达海外水准。其它，对色谱柱机能很关键的基本材料-----裸硅胶，国产的还不过关，在纯度、粒径和孔径的均一性方面和海外产物比拟，不同很大。
7、色谱柱本领的不同在那边？
答：色谱柱本领包罗填料本领和装柱本领，填料本领自不待言，填料的利害对色谱柱别离机能和取舍性有决计性影响。装柱本领也没有设想中的这么简朴，不同牢固相、不同粒径、不同柱管内径和长度，装柱工艺都有所不同，要装出精密、安定、均一的柱床，更多是一门艺术，须要阅历积蓄。
国内和海外想比，我以为色谱柱的不同在于：国内公司过去都不会本身开采填料，时时买海外现成填料装柱，买到的填料品质操纵权不在本身手里。其它由于装柱史乘短，阅历积蓄少，装柱工艺也没有统统到达海外水准。其它，对色谱柱机能很关键的基本材料-----裸硅胶，国产的还不过关，在纯度、粒径和孔径的均一性方面和海外产物比拟，不同很大。
8、柱子在甚么处境下能够冲洗一下筛板呢？本来也议论过这个题目，我也拆下来冲洗过，但我看到柱前段的浑浊愈甚，因而就用刀片刮了刮，尔后把冲洗好的筛板装置上去。题目处置了，但操纵寿命会不会淘汰呢？
答：柱头浑浊了，就掏出浑浊的，再装一些填料。由于列入你刮了些填料，那末宏观的塔板数就少了。假入你刮得未几，仅表面，或许便是一些脏物，是以，题目处置。然而往后还会有同样题目，再挂，那末不谨慎刮，影响柱效。倡议仍然装一个预柱。
9、要是柱子取下来安置一段工夫，须要做甚么保护吗？
答：对时时的反相柱，也便是洗洁净后放到纯甲醇（乙腈）也许是80%左右的甲醇（乙腈）水中，尔后用堵头塞紧柱两端，免得保管溶剂蒸发，该当不须要做特别的保护。
10、起伏相中列入适当的四氢呋喃能够改良峰形的机理是甚么？
答：《高效液相色谱办法及运用》于世林编著的上头说：甲醇为质子予以体、乙腈为质子承受体、四氢呋喃是偶极溶剂，该当除了极性影响，尚有其它的影响要素，至于别离机理，仍然对照繁杂的，不能当做是个全能办法。
11、对于色谱柱的填装题目！我限度以为目前色谱柱的填装时时有3种处境：1.海外临盆填料并填装完竣制品卖到国内；2.海外临盆填料，国内填装出售；3.国内临盆填料，国内填装出售。时时处境下，第1种处境卖的最贵，也品质最佳！但是我就不明确了：要是是填料的临盆很繁杂的话，那末填装上国内也跟不上去吗？为甚么换在国内填装就会浮现或多或少的一些小题目呢？
答：国内填装会浮现品质小题目，和国内当前广泛工做没有海外谨严干系吧。要是工艺本领上没有题目，又能拟订并实在履行一整套严峻的临盆品质经管办法，国内填装和海外填装并无差别。
12、国产色谱柱在商场上占领比例怎样啊？
答：国内色谱柱商场还没有人举办过科学统计，连一年色谱柱出售总量也众说纷云，更别说国内临盆色谱柱所占份额了。我推测是占30%左右吧。
13、预柱或保护柱用仍然不必的题目！本来解析中药品种时，我始终都是用保护柱。但到达新公司后，发掘众人都没有操纵，几个测验室连保护柱都没找到一个，也便是说众人历来都没有效过。后来问一个老职工，说是有或许影响方剂解析。我就想问：装置保护柱后会影响样本解析吗？咱们做的大多是头孢类的抗生素。
答：该当如此说，加之保护柱，必定有益于保护色谱柱不受一些颗粒物资的淤塞，必定无益于别离度和柱效，由于保护柱中心有着死体积的存在然而要是保护柱接得好，况且尽管操纵其般配性和常常退换，别离度和柱效该当影响并不大。
头孢类的抗生素也要看究竟是材料药仍然制剂喽，有些材料药，能够依照色谱柱的耗费取舍增加预柱（中心是个筛板），制剂的话，要是有辅料严峻侵犯也许起伏相盐分对照大，那仍然最佳配个保护柱。
14、用的是四元梯度泵A50%甲醇B50%水常常浮现停或进气泡这是甚么道理？
答：水/甲醇比例在55：45时，黏度和柱压有个极大值。50：50逼近了这个极值，柱压是对照高的，但影响柱压最大的仍然填料粒径和色谱柱内径，你这个实例中不知用的甚么规格的色谱柱？系统压力高，或许会因溶剂泵中的过滤头供液速率跟不上而导致气泡加入系统，停机也该当是由于气泡加入压力降落的道理，可思量退换液体通量更大的过滤头。
15、填料办法的前三种都是湿法吗，能不能对四种填充办法做一个简略的申明？
质料显示：在寻常前提下，填料粒度＞20μm时，干法填充制备柱较为符合；颗粒＜20μm时，湿法填充较为志愿。填充办法时时有4种①高压匀浆法，多用于解析柱和小范围制备柱的填充；②径向加压法，Waters专利；③轴向加压法，首要用于装填大直径柱；④干法。柱填充的本领性很强，大多半测验室操纵已填充好的商品柱。为甚么以20um为分界点？
16、想请您详细申明一下反冲色谱柱的办法，是不连探测器吗？
答：反冲便是将柱子反向连到系统中。由于有浑浊物反冲出来，固然不连探测器，出液端直接接到废液瓶就可以够。
17、要是不操纵不锈钢会商，而改用ＰＥＥＫ头，能否能够统统处置会商般配题目？
答：色谱柱会商原来多半不是色谱柱厂商本身临盆的，供货商有多个，VICI，Upchurch，Parker等，他们的准则彼此之间不统一，那色谱柱会商的准则就统一不起来。不过时时这个题目也不难明决的，换个会商就可以够了，况且目前有了万用会商，能够配一切不同类别的柱头，不暴露，联结死体积又很小。
18、有的厂商为防止淤塞，操纵了较大孔径（2-5um）的前筛板，这类处境反冲会将填料冲出。那末，你们在操纵申明书中会申明先后筛板的孔径吗？
答：要是先后筛板孔径差错称，厂商必定也会在申明书里稀奇提到的。
19、我在做多肽药物时碰到以下题目：1）.基线不安定摇动大，起伏相A：1％TFA水溶液B:1％TFA乙腈溶液探测波长nm流速1.0ml/ml甚么道理？怎么处置？TFA有甚么影响？起伏相中不加TFA见不到主峰，基线优异。2）做完肽类样本时怎么洗濯C18对照好；3）药典上先容测定分子量大于的样本，取舍柱子填料的孔径为30nm，30nm与10nm对结局有甚么差别？
答：该当是起“离子对”的影响吧。在做多肽类样本的功夫，A孔径的填料相对A孔径必定要取舍性好点，也便是别离度相对对照好点。起伏相列入TFA，在反相色谱别离多肽和卵白质的测验中，操纵三氟乙酸(TFA)做为离子对试剂是罕见的本领。起伏相中的三氟乙酸经过与疏水键合相和残留的极性表面以多种形式彼此影响，来改良峰形、克复峰展宽和拖尾题目。
三氟乙酸优于其余离子妆点剂的道理是它轻易蒸发，能够便利地从制备样本中撤除。另一方面，三氟乙酸的紫外最大吸取峰低于nm，对多肽在低波益处的探测侵犯很小。
20、watersAtlantisC18柱能够用较高比例的起伏相，那麽用完后该当怎麽冲洗？在什麽编制中保管比教符合？
答：反相柱均能够用底下通用的办法冲洗保护：
起伏相中不含缓冲盐
解析完竣后，用甲醇（或乙腈）：水＝90：10反向洗濯色谱柱45min
起伏相中含有缓冲盐
解析完竣后，先用甲醇（或乙腈）：水＝10：90反向洗濯45min，尔后再用甲醇（或乙腈）：水＝90：10反向洗濯色谱柱45min；（细致：甲醇（或乙腈）：水＝10：90轻易长菌，使历工夫不成超越3天）；
水性柱保管编制也不稀奇：短期保管在所用的起伏相中（不含缓冲盐），中历久保管在纯甲醇（乙腈）或80%的甲醇（乙腈）/水中。
21、正相硅胶柱时时保管在甚么溶剂内里对照符合？
答：短期和历久都倡议保管在正相测定所用的起伏相中，时时是正己烷和极小量的异丙醇。
22、磷酸盐缓冲盐浸透力强，为甚么，是由于与醋酸盐，枸椽酸盐比拟，基团小吗，操纵磷酸盐缓冲液与其它缓冲液比拟，会使色谱柱寿命淘汰几何？
答：经罕用磷酸盐，在其它前提差未几同样的处境下，柱子寿命必定比不必磷酸缓冲盐相对短一些。但用磷酸盐也有不成代替的益处吧，不然不成能目前大部份人还在用。
23、反相离子对色谱法中，离子对是怎样起影响的，是离子对试剂的非极性端消融在填料的非极性端里，解离端伸向起伏相，对含胺化合起离子互换影响，仍然样本与离子对生成精密的连合物，离子对试剂遮蔽化合物中的极性基团，仍然这类连合物是在解离与连合的动态均衡当中？
答：首先离子对试剂的解离端和对象离子造成离子缔合物，低落其极性，如此就可以较好的在柱子上保存。再者，依照疏水效应理论，离子对试剂的疏水端是很轻易和C18链彼此影响的，如此更轻易在柱子上保存，是以我以为离子对试剂影响是混杂保存机制，即纯正的反相保存和离子对保存机制协同影响。
24、四烷基季铵盐（如四丁基硫酸氢铵、四丁基溴化铵、四丁基氢氧化铵等）在水中电离后，也造成了相像N＋H(CH2CH3)3的构造N＋(CH2CH2CH2CH3)4，这类构造也能有效的与Si－O－造成较强的静电影响，此类离子对用的对照少，但它的影响仅是遮蔽Si－O－吗，它对物资的保存机能有何影响，测验中发掘探测胺化物时，起伏相中列入磷酸缓冲盐有增长物资保存的趋向，而列入三乙胺则会低落物资的保存才略？
答：前方提到的四丁基氢氧化铵等离子对试剂确凿不如辛磺酸钠等极性基是阴离子的离子对试剂用得广泛，道理是酸类极性物资很轻易经过低落pH值的办法提升在反相色谱中的保存才略，低落pH可制服酸的电离，使酸处于中性状况而与疏水碳链的做使劲增加。而碱类解析物则受硅胶基质pH上限的严峻影响（过去上限是8，后来抬到10，直到近来杂化硅胶才将pH上限提到12左右）。
铵盐类离子对试剂确凿有辛磺酸钠等所不具备的障蔽硅醇基影响，但其首要影响仍然疏水端和疏水牢固相连合，外露的阳离子亲水端和酸阴离子影响，进而提升其保存才略。固然同样尚有第二种诠释机理，离子对试剂先和解析物连合，遮蔽极性基，进而提升极性解析物在反相色谱中的保存才略。况且丁基比辛基疏水性差，这类处境下，以为反面的连合机理占优势的或许性更大。
探测胺类化合物，列入三乙胺预先和硅醇基连合，胺和硅醇基影响被三乙胺代替，保存降落是必定的。
25、统一根色谱柱在解析完三聚氰胺后，再解析苯甲酸、山梨酸、糖精钠时为甚么保存工夫会提早？
答：色谱柱被强保存物资浑浊后，保存工夫提早和滞后的处境都有，详细要看浑浊物的性质，还要看解析物、牢固相和浑浊物三者协同影响的处境，处境对照繁杂，有意候对照难猜测是提早仍然滞后。不过你通常保护的功夫，细致在测定后将浑浊物用有机溶剂反冲冲洗，就可以够减弱或防止这类处境的浮现。倡议每个解析办法用特地的色谱柱，长眺望，如此更减省色谱柱的花费。
26、HPLC柱前衍生和柱后衍生的干系题目？1）为甚么要衍生？2）衍生化的分类？3）举办衍生，合用的化合物有哪些？4）举办衍生化的请求有哪些？5）柱前衍生和柱后衍生的优瑕玷？
答：色谱本领中的化学衍生法系指在色谱进程顶用特别的化学试剂（时时称为衍生化试剂或符号试剂）使样本成份动弹响应的衍生物此后举办别离探测或举办探测的办法。方针为：1．将紫外—看来强吸取机能基团引入被探测对象或将其动弹成荧光衍生物，以提升探测敏捷度；2提升对解析样本的别离和取舍性。
从能否与HPLC系统联机的角度，化学衍生法分为在线online）与离线∣Offline）两种。从产生衍生化的形势，分为柱前衍生法pre-columnderivatization）与柱后衍生法（post-columnderivatization）两种。当前，在HPLC中，以离线的柱前衍生法（简称柱前衍生法）与在线的柱后衍生法（简称柱后衍生法）操纵占多数。
27、多个样本不好不离的功夫，叨教该怎么经过取舍符合的柱子来提升别离度？
答：提升别离度可从三个首要影响要一向思量，柱效、取舍性和保存因子。可经过减小填料粒径和增长柱长提升柱效；取舍性和牢固相取舍以及pH前提干系，经过取舍符合的色谱柱和符合的pH，能够提升取舍性；有意候合适拉长出峰工夫增长保存因子，也可提升别离度。
28、苯基柱，氰基柱该甚么功夫思量用？
答：苯基柱用于含苯环的芬芳族化合物的测准时，具备较高的取舍性。CN柱可做为一个保存才略最弱的反相柱操纵，也可做为一个活性低落的正相柱操纵（保存工夫比硅胶柱和氨基柱低许多）。
29、同样类别柱子尚有长度，粒径等不同，这些该怎么去取舍？
答：长度和粒径都是用来改革柱效的，取舍规则是够用就好。
30、我头几天方才装上一个新的C18柱，在进样过去我用%的甲醇冲了半个多小时。方才看到上头写的要活化甚么的？不了解我只洗濯半小时就开端用对柱子有没有影响？对出峰甚么的有没有影响呢？
答：不是一切的测定，都须要对新柱子用所测样本老化。但先按办法程序进样几针，观看到峰面积保存工夫不再有显然变动，再开端正式测定，这是一个好习惯。按你目前的做法，要是第一针和第二针的峰面积、保存工夫没有变动，就连续做没影响吧。
31、目前色谱柱和仪器的接口还没有准则化吗，除了探测池的收支管较小外，色谱柱的接口与ＰＥＥＫ头不般配的有哪个型号的色谱柱，此后操纵的功夫须要细致一点。同时发掘操纵过金属会商的色谱柱再换成ＰＥＥＫ头，常易漏液，这是由于金属头易使色谱柱接口变形吗？
答：色谱柱会商原来多半不是色谱柱厂商本身临盆的，供货商有多个，VICI，Upchurch，Parker等，他们的准则彼此之间不统一，那色谱柱会商的准则就统一不起来。不过时时这个题目也不难明决的，换个会商就可以够了，况且目前有了万用会商，能够配一切不同类别的柱头，不暴露，联结死体积又很小。
32、通俗的C18柱能做为正相色谱柱操纵吗？正相色谱编制中最罕用也最通俗的是那种色谱柱。正相柱在操纵进程中与反向柱比拟有甚么须要细致的场合？
答：通俗C18柱做为正相柱操纵，我还没据说过。正相色谱别离形式是指牢固相的极性比起伏相的极性大，反过来，起伏相极性大便是反相。C18牢固相属于疏水性相对对照强的，疏水性强便是极性很弱，该当找不出极性比它更弱的起伏相了。
正相编制罕见的柱子有：硅胶柱、氨基柱、CN基柱和Diol二醇基柱，最通俗的该当便是硅胶柱。正相柱和反相柱比，最须要细致的是水份，正相柱对水份稀奇敏锐，起伏相中水份含量的些微变动对保存工夫影响很大，因而正相柱测定前均衡工夫须要几个小时以至更长。
33、色谱柱的柱头类别与不锈钢毛细管会商有6种联结方法（在教材内里提到），那末咱们用户时时是液相色谱仪是牢固某一个厂家，而是依照样本探测须要退换不同类别的色谱柱，那末怎么决断我所置备的色谱柱能否与不锈钢毛细管能否般配呢，我过去不过了解安捷伦和waters都有规章他们本身家的柱子与本身家的仪器配套是最符合的，而其余厂家的色谱柱都很少说起，在不了解的处境下，咱们该怎么取舍？月旭的色谱柱柱头类别属于哪一品种别呢？
答：不锈钢毛细管会商有个瑕玷，用过一次后卡匝场所和间隔毛细管末了的长度就牢固死了。要是下次用的色谱柱的柱头接口深度和本来的不同，就轻易造成死体积和透露。造成的死体积时时不大，要是只引发柱效的轻微降落而没引发拖尾，这个题目就轻易被疏忽。引发众人
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