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1、网上对柱子能否也许反冲持续有斗嘴，那甚么样的柱子也许反冲，甚么不行以。反冲后是正者用，仍旧反着用。详细到各型号柱子不光是ODS柱，其余如正向柱、氨基柱、离子互换柱等最佳都有注解。答：普遍的正相悖相柱理当都能反冲，惟独两端筛板孔径错的称的柱子不能反冲，不过当今如此的柱子曾经比拟有数了。反冲是为了把柱头的浑浊物洗濯掉，反冲后仍旧正着用比拟好，免得柱子的两端都被浑浊。咱们持续发起的是：正向应用，反向洗濯。
2、我在做法子开辟的时光,用乙腈和水做为活动相，在调度梯度的时光发掘，刚发端用60%乙腈，RT为2.5分钟，调到40%乙腈，RT没有变动，30%也没有变动，持续调到20%的时光，RT忽然变到了约13分钟，请示这是甚么起因?我用的是离子互换柱。答：离子互换柱的保存时光重要由洗脱液的离子强度和pH决意，你目前讲的比拟简朴，须要把你的法子说的详细一点才具做详细的剖析。比如剖析物是甚么情景，其含有极性电离基团和非极性基团是甚么性质？离子互换柱是围拢物基质仍旧硅胶基质？水相是甚么缓冲盐？
3、对于一根罕用的c18柱，拿到一根新柱的时光理当怎么停止活化及维持？为甚么要如此做？答：新柱活化，现实上是一个均衡的进程，除了用活动相均衡外，偶尔候还必需用所测样本对新柱停止均衡，格外是测定分子量比拟高的多肽，格外重大。由于分子量高的物资分子，散布速率慢，均衡所需时光也响应较长。详细均衡方法也很简朴，多进一再样本，直到峰面积和保存时光平稳，再停止正式进样测定。假如要放慢均衡时光，把前方用来均衡的进样样本浓度加大，或许不等洗脱告竣，持续进样多针。用待测物对新柱均衡，方针是将硅胶基质填料表面具备非奇异性吸附的位点的吸附本领饱和掉。
4、测定多肽，普遍采纳甚么柱子？活动相是乙腈和水，尚有微量的TFA。格外是像相仿三肽的短肽，理当怎么抉择柱子？答：分子量不高的多肽普遍采用通例C18柱就可以测定，也实用离子互换柱、水性C18柱和Hilic亲水影响柱的。
5、氨基柱在进酸性样本时，很伤柱子，如应用一段时光后，柱效升高，峰形变换，何如复原？答：氨基柱测酸性样本，理当是用氨基柱的HILIC形式。酸的存在或者会使略带负电荷的氨基官能团质子化，以致应用一段时光后对于某些类的剖析物保存性质有所变换或展目前柱效下落。提倡：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液洗濯该柱（洗濯后固然要再用不含碱的活动相洗去过剩氨），以来再停止剖析这类酸性剖析物时提倡在活动相中稍微增加一些氨如0.1％。
6、色谱柱的技艺都有哪些？比方封尾等，这些技艺在运历时都表目前何处？答：色谱柱技艺包罗填料技艺和装柱技艺，填料技艺自不待言，填料的优劣对色谱柱别离本能和抉择性有决意性影响。装柱技艺也没有设想中的这么简朴，不同牢固相、不同粒径、不同柱管内径和长度，装柱工艺都有所不同，要装出周密、平稳、均一的柱床，更多是一门艺术，须要阅历累积。国内和海外想比，我觉得色谱柱的不同在于：国内公司夙昔都不会自身开辟填料，普遍买海外现成填料装柱，买到的填料原料节制权不在自身手里。此外由于装柱汗青短，阅历累积少，装柱工艺也没有绝对抵达海外程度。此外，对色谱柱本能很关键的原形材料-----裸硅胶，国产的还不过关，在纯度、粒径和孔径的均一性方面和海外产物比拟，不同很大。
7、色谱柱技艺的不同在何处？答：液相色谱柱装填现实上是有必然技艺和程序，或者尚有一些幸运。普遍应用高压匀浆法子装填。也便是能让填料在溶剂内匀称地悬浮。而后用片时高压压实，这现实上用到了不同比例的匀浆液体，和适宜的压力。压力太大，颗粒击碎，压力过小，塔板数少。同时压力须要平稳，不然散布不均，拖尾严峻。同时尚有头上平坦程度。套上套，就也许用了。
8、柱子在甚么情景下也许洗涤一下筛板呢？从来也商议过这个题目，我也拆下来洗涤过，但我看到柱前段的浑浊愈甚，因而就用刀片刮了刮，而后把洗涤好的筛板装置上去。题目束缚了，但应用寿命会不会淘汰呢？答：柱头浑浊了，就掏出浑浊的，再装一些填料。由于参预你刮了些填料，那末宏观的塔板数就少了。假入你刮得未几，仅表面，或者便是一些脏物，因而，题目束缚。不过以来还会有同样题目，再挂，那末不严慎刮，影响柱效。提倡仍旧装一个预柱。
9、假如柱子取下来安插一段时光，须要做甚么守护吗？答：对普遍的反相柱，也便是洗洁白后放到纯甲醇（乙腈）或许是80%左右的甲醇（乙腈）水中，而后用堵头塞紧柱两端，免得保管溶剂蒸发，理当不须要做非凡的守护。
10、活动相中参预适当的四氢呋喃也许改观峰形的机理是甚么？答：《高效液相色谱法子及运用》于世林编著的上头说：甲醇为质子赋予体、乙腈为质子采用体、四氢呋喃是偶极溶剂，理当除了极性影响，尚有此外的影响成分，至于别离机理，仍旧比拟繁杂的，不能当做是个全能法子。
11、对于色谱柱的填装题目！我小我觉得目前色谱柱的填装普遍有3种情景：1.海外临盆填料并填装告竣制品卖到国内；2.海外临盆填料，国内填装贩卖；3.国内临盆填料，国内填装贩卖。普遍情景下，第1种情景卖的最贵，也原料最佳！然而我就不清楚了：假如是填料的临盆很繁杂的话，那末填装上国内也跟不上去吗？为甚么换在国内填装就会浮现或多或少的一些小题目呢？答：国内填装会浮现原料小题目，和国内当今广大劳动没有海外谨严联系吧。假如工艺技艺上没有题目，又能拟定并确切实行一整套严厉的临盆原料办理法子，国内填装和海外填装并无差别。
12、国产色谱柱在墟市上占领比例何如啊？国内色谱柱墟市还没有人停止过科学统计，连一年色谱柱贩卖总量也众说纷云，更别说国内临盆色谱柱所占份额了。我测度是占30%左右吧。
13、预柱或守护柱用仍旧不必的题目！从来剖析中药品种时，我持续都是用守护柱。但到达新公司后，发掘众人都没有应用，几个试验室连守护柱都没找到一个，也便是说众人向来都没实用过。后来问一个老职工，说是有或者影响方剂剖析。我就想问：装置守护柱后会影响样本剖析吗？咱们做的大多是头孢类的抗生素。答：理当如此说，加之守护柱，一定有益于守护色谱柱不受一些颗粒物资的阻塞，一定无益于别离度和柱效，由于守护柱中央有着死体积的存在，不过假如守护柱接得好，并且只管节制其般配性和常常替换，别离度和柱效理当影响并不大。头孢类的抗生素也要看究竟是质料药仍旧制剂喽，有些质料药，也许依据色谱柱的消耗抉择增加预柱（中央是个筛板），制剂的话，假如有辅料严峻侵犯或许活动相盐分比拟大，那仍旧最佳配个守护柱。
14、用的是四元梯度泵A50%甲醇B50%水，常常浮现停或进气泡这是甚么起因？答：水/甲醇比例在55：45时，黏度和柱压有个极大值。50：50逼近了这个极值，柱压是比拟高的，但影响柱压最大的仍旧填料粒径和色谱柱内径，你这个实例中不知用的甚么规格的色谱柱？系统压力高，或者会因溶剂泵中的过滤头供液速率跟不上而以致气泡投入系统，停机也理当是由于气泡投入压力下落的起因，可思考替换液体通量更大的过滤头。
15、材料显示：在平常前提下，填料粒度＞20μm时，干法填充制备柱较为适宜；颗粒＜20μm时，湿法填充较为抱负。填充法子普遍有4种①高压匀浆法，多用于剖析柱和小范围制备柱的填充；②径向加压法，Waters专利；③轴向加压法，重要用于装填大直径柱；④干法。柱填充的技艺性很强，大多半试验室应用已填充好的商品柱。为甚么以20um为分界点？填料法子的前三种都是湿法吗，能不能对四种填充法子做一个简略的表明？
16、想请您详细表明一下反冲色谱柱的法子，是不连探测器吗？答：反冲便是将柱子反向连到系统中。由于有浑浊物反冲出来，固然不连探测器，出液端直接接到废液瓶就也许。
17、假如不应用不锈钢磋议，而改用ＰＥＥＫ头，能否也许绝对束缚磋议般配题目？答：色谱柱磋议原本多半不是色谱柱厂商自身临盆的，供货商有多个，VICI，Upchurch，Parker等，他们的准则互相之间不统一，那色谱柱磋议的准则就统一不起来。不过普遍这个题目也不难懂决的，换个磋议就也许了，并且目前有了万用磋议，也许配一切不同范例的柱头，不走漏，接连死体积又很小。
18、有的厂商为防止阻塞，应用了较大孔径（2-5um）的前筛板，这类情景反冲会将填料冲出。那末，你们在应用表明书中会表明先后筛板的孔径吗？答：月旭在表明书上是说了筛板直径都是2um，此外厂商假如先后筛板孔径错的称，一定也会在表明书里格外提到的。
19、我在做多肽药物时碰到以下题目：1）.基线不平稳摇动大，活动相A：1％TFA水溶液B:1％TFA乙腈溶液探测波长nm流速1.0ml/ml甚么起因？怎么束缚？TFA有甚么影响？活动相中不加TFA见不到主峰，基线精良。2）做完肽类样本时怎么洗濯C18比拟好；3）药典上引见测定分子量大于的样本，抉择柱子填料的孔径为30nm，30nm与10nm对终归有甚么差别？答：理当是起“离子对”的影响吧。在做多肽类样本的时光，A孔径的填料相对A孔径一定要抉择性好点，也便是别离度相对比拟好点。活动相参预TFA，在反相色谱别离多肽和卵白质的试验中，应用三氟乙酸(TFA)做为离子对试剂是罕见的机谋。活动相中的三氟乙酸经过与疏水键合相和残留的极性表面以多种形式互相影响，来改观峰形、战胜峰展宽和拖尾题目。三氟乙酸优于其余离子润色剂的起因是它简朴蒸发，也许便利地从制备样本中撤除。另一方面，三氟乙酸的紫外最大摄取峰低于nm，对多肽在低波优点的探测侵犯很小。
20、watersAtlantisC18柱也许用较高比例的活动相，那麽用完后理当怎麽洗涤？在什麽编制中保管比教适宜？答：反相柱均也许用上面通用的法子洗涤维持：活动相中不含缓冲盐剖析告竣后，用甲醇（或乙腈）：水＝90：10反向洗濯色谱柱45min活动相中含有缓冲盐，剖析告竣后，先用甲醇（或乙腈）：水＝10：90反向洗濯45min，而后再用甲醇（或乙腈）：水＝90：10反向洗濯色谱柱45min；（注意：甲醇（或乙腈）：水＝10：90简朴长菌，使历时光不行高出3天）；水性柱保管编制也不格外：短期保管在所用的活动相中（不含缓冲盐），中长久保管在纯甲醇（乙腈）或80%的甲醇（乙腈）/水中。
21、正相硅胶柱普遍保管在甚么溶剂内部比拟适宜？答：短期和长久都提倡保管在正相测定所用的活动相中，普遍是正己烷和极小量的异丙醇。
22、磷酸盐缓冲盐浸透力强，为甚么，是由于与醋酸盐，枸椽酸盐比拟，基团小吗，应用磷酸盐缓冲液与此外缓冲液比拟，会使色谱柱寿命缩小几何？答：经罕用磷酸盐，在此外前提差未几同样的情景下，柱子寿命一定比不必磷酸缓冲盐相对短一些。但用磷酸盐也有不行庖代的好处吧，不然不行能目前大部份人还在用。
23、反相离子对色谱法中，离子对是何如起影响的，是离子对试剂的非极性端熔解在填料的非极性端里，解离端伸向活动相，对含胺化合起离子互换影响，仍旧样本与离子对生成周密的联合物，离子对试剂遮蔽化合物中的极性基团，仍旧这类联合物是在解离与联合的动态均衡当中？答：首先离子对试剂的解离端和标的离子孕育离子缔合物，升高其极性，如此就可以较好的在柱子上保存。再者，依据疏水效应理论，离子对试剂的疏水端是很简朴和C18链互相影响的，如此更简朴在柱子上保存，因而我觉得离子对试剂影响是搀杂保存机制，即简朴的反相保存和离子对保存机制共通影响。
24、四烷基季铵盐（如四丁基硫酸氢铵、四丁基溴化铵、四丁基氢氧化铵等）在水中电离后，也孕育了相仿N＋H(CH2CH3)3的布局N＋(CH2CH2CH2CH3)4，这类布局也能灵验的与Si－O－孕育较强的静电影响，此类离子对用的比拟少，但它的影响仅是遮蔽Si－O－吗，它对物资的保存本能有何影响，试验中发掘探测胺化物时，活动相中参预磷酸缓冲盐有增长物资保存的趋向，而参预三乙胺则会升高物资的保存本领？答：前方提到的四丁基氢氧化铵等离子对试剂的确不如辛磺酸钠等极性基是阴离子的离子对试剂用得广大，起因是酸类极性物资很简朴经过升高pH值的法子抬高在反相色谱中的保存本领，升高pH可抵御酸的电离，使酸处于中性形态而与疏水碳链的做使劲增加。而碱类剖析物则受硅胶基质pH上限的严峻影响（夙昔上限是8，后来抬到10，直到近来杂化硅胶才将pH上限提到12左右）。铵盐类离子对试剂的确有辛磺酸钠等所不具备的樊篱硅醇基影响，但其重要影响仍旧疏水端和疏水牢固相联合，外露的阳离子亲水端和酸阴离子影响，进而抬高其保存本领。固然同样尚有第二种注解机理，离子对试剂先和剖析物联合，遮蔽极性基，进而抬高极性剖析物在反相色谱中的保存本领。并且丁基比辛基疏水性差，这类情景下，觉得背面的联合机理占优势的或者性更大。探测胺类化合物，参预三乙胺预先和硅醇基联合，胺和硅醇基影响被三乙胺庖代，保存下落是一定的。
25、统一根色谱柱在剖析完三聚氰胺后，再剖析苯甲酸、山梨酸、糖精钠时为甚么保存时光会提早？答：色谱柱被强保存物资浑浊后，保存时光提早和滞后的情景都有，详细要看浑浊物的性质，还要看剖析物、牢固相和浑浊物三者共通影响的情景，情景比拟繁杂，偶尔候比拟难推断是提早仍旧滞后。不过你通常维持的时光，注意在测定后将浑浊物用有机溶剂反冲洗涤，就也许减弱或防止这类情景的浮现。提倡每个剖析法子用特意的色谱柱，长眺望，如此更俭省色谱柱的花费。
26、HPLC柱前衍生和柱后衍生的联系题目？1）为甚么要衍生？2）衍生化的分类？3）停止衍生，合用的化合物有哪些？4）停止衍生化的请求有哪些？5）柱前衍生和柱后衍生的优弱点？答：色谱技艺中的化学衍生法系指在色谱进程顶用非凡的化学试剂（普遍称为衍生化试剂或记号试剂）使样本成份转换响应的衍生物以来停止别离探测或停止探测的法子。方针为：1．将紫外—看来强摄取功效基团引入被探测标的或将其转换成荧光衍生物，以抬高探测伶俐度；2.抬高对剖析样本的别离和抉择性。从能否与HPLC系统联机的角度，化学衍生法分为在线online）与离线∣Offline）两种。从产生衍生化的时势，分为柱前衍生法pre-columnderivatization）与柱后衍生法（post-columnderivatization）两种。当今，在HPLC中，以离线的柱前衍生法（简称柱前衍生法）与在线的柱后衍生法（简称柱后衍生法）应用占多数。
27、多个样本不好不离的时光，请示该怎么经过抉择适宜的柱子来抬高别离度？答：抬高别离度可从三个重要影响成分来思考，柱效、抉择性和保存因子。可经过减小填料粒径和增长柱长抬高柱效；抉择性和牢固相抉择以及pH前提联系，经过抉择适宜的色谱柱和适宜的pH，也许抬高抉择性；偶尔候合适伸长出峰时光增长保存因子，也可抬高别离度。
28、苯基柱，氰基柱该甚么时光思考用？答：苯基柱用于含苯环的芬芳族化合物的测准时，具备较高的抉择性。CN柱可做为一个保存本领最弱的反相柱应用，也可做为一个活性升高的正相柱应用（保存时光比硅胶柱和氨基柱低良多）。
29、同样范例柱子尚有长度，粒径等不同，这些该怎么去抉择？答：长度和粒径都是用来变换柱效的，抉择轨则是够用就好。
30、我头几天适才装上一个新的C18柱，在进样夙昔我用%的甲醇冲了半个多小时。适才看到上头写的要活化甚么的？不领会我只洗濯半小时就发端用对柱子有没有影响？对出峰甚么的有没有影响呢？答：不是一切的测定，都须要对新柱子用所测样本老化。但先按法子程序进样几针，查看到峰面积保存时光不再有显然变动，再发端正式测定，这是一个好习惯。按你目前的做法，假如第一针和第二针的峰面积、保存时光没有变动，就继承做没影响吧。
31、目前色谱柱和仪器的接口还没有准则化吗，除了探测池的收支管较小外，色谱柱的接口与ＰＥＥＫ头不般配的有哪个型号的色谱柱，以来应用的时光须要注意一点。同时发掘应用过金属磋议的色谱柱再换成ＰＥＥＫ头，常易漏液，这是由于金属头易使色谱柱接口变形吗？答：色谱柱磋议原本多半不是色谱柱厂商自身临盆的，供货商有多个，VICI，Upchurch，Parker等，他们的准则互相之间不统一，那色谱柱磋议的准则就统一不起来。不过普遍这个题目也不难懂决的，换个磋议就也许了，并且目前有了万用磋议，也许配一切不同范例的柱头，不走漏，接连死体积又很小。
32、普遍的C18柱能做为正相色谱柱应用吗？正相色谱编制中最罕用也最普遍的是那种色谱柱。正相柱在应用进程中与反向柱比拟有甚么须要注意的地点？答：普遍C18柱做为正相柱应用，我还没传闻过。正相色谱别离形式是指牢固相的极性比活动相的极性大，反过来，活动相极性大便是反相。C18牢固相属于疏水性相对比拟强的，疏水性强便是极性很弱，理当找不出极性比它更弱的活动相了。正相编制罕见的柱子有：硅胶柱、氨基柱、CN基柱和Diol二醇基柱，最普遍的理当便是硅胶柱。正相柱和反相柱比，最须要注意的是水份，正相柱对水份格外敏锐，活动相中水份含量的些微变动对保存时光影响很大，是以正相柱测定前均衡时光须要几个小时以至更长。
33、色谱柱的柱头范例与不锈钢毛细管磋议有6种接连方法（在课本内部提到），那末咱们用户普遍是液相色谱仪是牢固某一个厂家，而是依据样本探测须要替换不同范例的色谱柱，那末怎么判定我所采办的色谱柱能否与不锈钢毛细管能否般配呢，我夙昔然而领会安捷伦和waters都有规矩他们自身家的柱子与自身家的仪器配套是最适宜的，而其余厂家的色谱柱都很少说起，在不领会的情景下，咱们该怎么抉择？月旭的色谱柱柱头范例属于哪一种范例呢？答：不锈钢毛细管磋议有个弱点，用过一次后卡匝地位和间隔毛细管结尾的长度就牢固死了。假如下次用的色谱柱的柱头接口深度和从来的不同，就简朴孕育死体积和走漏。孕育的死体积普遍不大，假如只引发柱效的微小下落而没引发拖尾，这个题目就简朴被忽视。引发众人
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